微量热泳动(microscale thermophoresis, MST)是一种分析生物分子相互作用的技术。这项技术基于生物分子的热泳动,使用红外激光进行局部加热导致分子定向移动,继而通过荧光分析温度梯度场中的分子分布比。MST技术能够检测到由于结合而引起的生物分子的大小、电荷和水化层的变化。相互作用的过程可以在天然条件下,无需固定、任何生物溶液中完成测量。 一 技术参数及主要特征: 1.可测定样品类型:离子、化合物、核酸、多肽、蛋白、糖类、脂质体、纳米颗粒、病毒等; 2.测定亲和力(KD值)范围:1pM – mM; 3.测定样品的分子量范围:101 - 107 Da; 4.获得亲和力所需要的蛋白样品量小于0.5μg; 5.一次可测定的样品数量:16个; 6.每个样品所需体积:4μL; 7.获得亲和力所需要的测定时间:10 min; 8.对测定缓冲液没有限制,包括但不限于含去垢剂的缓冲液、含DMSO(0-100%)等有机溶剂的缓冲液、细胞裂解液、上清液、血清、血浆、组织匀浆等; 9.仪器无需预热可直接开机使用,实验完成后不需要对仪器进行清洗维护。 二 应用领域: 1.测定离子、化合物、核酸、多肽、蛋白、多糖、脂质体、纳米颗粒、病毒颗粒等各类分子之间的亲和力,进行信号调控机制、配体-受体作用机制等方面的研究; 2.抗体及化合物药物筛选及候选药物优化; 3.测定化学计量数,即生物分子结合位点的数目; 4.测定结合的热力学参数:ΔG (自由能 )、ΔH (焓)、ΔS (熵); 5.进行竞争性试验,获得Ki; 6.测定蛋白寡聚化的亲和力和动力学数据。 |